從電子躍遷的角度來講,熒光是指某些物質(zhì)吸收了與它本身特征頻率相同的光線以后,原子中的某些電子從基態(tài)中的低振動能級躍遷到較高的某些振動能級。
電子在同類分子或其他分子中撞擊,消耗了相當?shù)哪芰浚瑥亩陆档诫娮蛹ぐl(fā)態(tài)中的低振動能級,能量的這種轉(zhuǎn)移形式稱為無輻射躍遷。
由低振動能級下降到基態(tài)中的某些不同能級,同時發(fā)出比原來吸收的頻率低、波長長的一種光,就是熒光。被化合物吸收的光稱為激發(fā)光,產(chǎn)生的熒光稱為發(fā)射光。
熒光的波長總要長于分子吸收的紫外光波長,通常在可見光范圍內(nèi)。熒光的性質(zhì)與分子結(jié)構(gòu)有密切關系,不同結(jié)構(gòu)的分子被激發(fā)后,并不是都能發(fā)射熒光。
選擇性高,只對熒光物質(zhì)有響應;靈敏度也高,低檢出限可達10-12ug/ml,適合于多環(huán)芳烴及各種熒光物質(zhì)的痕量分析。也可用于檢測不發(fā)熒光但經(jīng)化學反應后可發(fā)熒光的物質(zhì)。如在酚類分析中,多數(shù)酚類不發(fā)熒光,為此先經(jīng)處理使其變?yōu)闊晒馕镔|(zhì),而后進行分析。
定量基礎
在光致發(fā)光中,發(fā)射出的輻射總依賴于所吸收的輻射量。由于一個受激發(fā)的分子回到基態(tài)時可能以無輻射躍遷的形式產(chǎn)生能量損失,因而發(fā)射輻射的光子數(shù)通常都少于吸收輻射的光子數(shù),它以量子效率Q來表示。
在固定的實驗條件下,量子效率是個常數(shù),通常Q小于1。對可用熒光檢測的物質(zhì)來說,Q值一般在0.1~0.9之間。熒光強度F與吸收光強度成正比。
熒光快速檢測儀對于稀溶液,熒光強度與熒光物質(zhì)溶液濃度、摩爾吸光系數(shù)、吸收池厚度、入射光強度、熒光的量子效率及熒光的收集效率等成正相關。在其他因素保持不變的條件下,物質(zhì)的熒光強度與該物質(zhì)溶液濃度成正比,這是熒光檢測器的定量基礎。熒光檢測器屬于溶質(zhì)型檢測器,可直接用于定量分析。
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